二氧化碳孵箱是細胞培養、微生物實驗及組織工程研究的核心設備,其通過精準控制溫度、濕度和二氧化碳濃度,模擬體內生理環境,保障樣本穩定生長。但高溫高濕的內部環境極易滋生細菌、真菌、支原體等污染物,導致實驗數據失效、樣本損壞甚至實驗項目終止。為杜絕污染隱患,保障實驗可靠性,結合設備特性與實操經驗,制定本使用規范。

使用前準備是防污染的第一道防線。需提前檢查孵箱外觀及密封性,確認門封條無破損、無污漬,避免外界空氣滲入。用70%酒精擦拭孵箱內壁、擱板及水盤,杜絕殘留污染物。水盤需注入無菌蒸餾水,可添加少量硫酸銅抑制細菌生長,嚴禁使用自來水或普通超純水,防止微生物帶入。同時校準溫度、二氧化碳濃度及濕度傳感器,確保參數精準,新設備或長期停用后,需空箱運行24小時并完成滅菌,方可放入樣本。
規范操作流程,減少人為污染。操作人員需穿戴無菌實驗服、手套,操作前用消毒劑清潔手套,避免徒手接觸樣本及孵箱內部構件。樣本放入時需分區擺放,保留10%-15%空隙保障氣流均勻,避免堆疊,培養瓶蓋子朝向門外,防止冷凝水滴落污染樣本。嚴格控制開門頻率與時間,單次開門不超過30秒,減少內外環境交換導致的污染風險及參數波動。所有放入孵箱的器皿、耗材需經高壓蒸汽滅菌或75%酒精擦拭消毒,培養基需提前預平衡,避免溫差刺激樣本及環境波動。
定期維護消毒,阻斷污染滋生。執行常態化清潔:每周消毒水盤并更換無菌水,每月用非腐蝕性消毒劑擦拭孵箱內部及高頻接觸點,每6個月進行一次深度凈化循環及傳感器校準。配備過濾系統的孵箱,需按制造商要求定期更換過濾器,阻擋空氣中的微生物進入。禁止使用含氯消毒劑,防止腐蝕內膽,頑固污漬可用1%SDS溶液浸泡后擦拭處理。
強化應急處理,降低污染影響。發現孵箱內有污染跡象,立即取出所有樣本,區分污染與未污染樣本并妥善處理,避免交叉污染。清潔孵箱內壁、擱板及水盤,采用高溫干熱滅菌或過氧化氫消毒方式進行全面滅菌,確認無殘留后再重啟設備。做好使用及維護記錄,詳細標注操作時間、參數、清潔情況及異常處理過程,便于追溯排查。
規范使用二氧化碳孵箱,是保障實驗質量、延長設備壽命的關鍵。全體操作人員需嚴格恪守本規范,樹立“預防為先、全程管控”的防污染意識,將每一個操作細節落到實處,從源頭阻斷污染途徑,為科研實驗提供潔凈、穩定的環境支撐。